土鳖虫的鉴别

　　①本品粉末灰棕色。体壁碎片深棕色或黄色，表面有不规则纹理，其上着生短粗或细长刚毛，常可见刚毛脱落后的圆形毛窝，直径5～32μm；刚毛棕黄色或黄色，先端锐尖或钝圆，长12～270μm，直径10～32μm ，有的具纵直纹理。横纹肌纤维无色或淡黄色，常碎断，有细密横纹，平直或呈微波状，明带较暗带为宽。

　　②（ 2 ）取本品细粉 1g ，加甲醇 25ml ，超声提取 30 分钟，滤过，滤液蒸干，加甲醇 5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取土鳖虫对照药材 1g ，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典 2000 年版一部附录 VI B ）试验，吸取上述两种溶液各 10μl ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以甲苯 - 二氯甲烷 - 丙酮（ 5 ： 5 ： 0.5 ）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯（ 365nm ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以香草醛硫酸试液， 105 ℃ 烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　【含量测定】尿囊素 照高效液相色谱法（中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D ）测定。

　　色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈（ A ） -0.1% 醋酸（ B ）（用氨水调 pH 值至 5.6-6.0 ）为流动相，采用梯度洗脱： 0min ， 25%A ； 10min ， 25%A ； 15min ， 80%A ； 20min ， 80%A ； 21min ， 25%A ；检测波长 360nm 。理论板数按尿囊素 A 峰计，应不低于 1500 。

　　对照品溶液的制备 精密称取尿囊素对照品置量瓶中，加 0.02mol/L 盐酸溶解，制成每 1ml 含尿囊素 50μg 的溶液。精密吸取上述溶液 5ml ，置 10ml 量瓶中，加 0.6mol/L 氢氧化钠 2ml ，于 85 ℃ 水浴中水解 60 分钟，再加 1mg/ml 的 2 ， 4- 二硝基苯肼（溶于 2mol/L 盐酸中） 2ml ，继续于 85 ℃ 反应 20 分钟；待溶液冷却至室温后加 0.02mol/L 盐酸至刻度，摇匀，即得。

　　供试品溶液的制备 取本品细粉，混匀，精密称取约 0.5g ，加入甲醇 25ml ，超声处理（功率 250W ，频率 40KHz ） 45 分钟，滤过，滤液挥干，加 5ml 乙醚洗涤残渣，弃去乙醚；残渣挥干后用 0.02mol/L HCl 5ml 分次溶解残渣并转移至 10ml 量瓶中，加 0.6mol/L 氢氧化钠 2ml ，于 85 ℃ 水浴中水解 60 分钟，再加 1mg/ml 的 2 ， 4- 二硝基苯肼（溶于 2mol/L 盐酸中） 2ml ，继续于 85 ℃ 反应 20 分钟；待溶液冷却至室温后加 0.02mol/L 盐酸至刻度，摇匀，即得。

　　测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl ，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

　　本品含尿囊素（ C 4 H 6 N 4 O 3 ）应不 少 于 0.035% 。